ATCC細(xì)胞株在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。ATCC細(xì)胞株一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化貼壁細(xì)胞成單個(gè)細(xì)胞，也可加入乙二胺四乙酸（EDTA）提高消化能力，EDTA 是一種二價(jià)離子的螯合劑，能抑制細(xì)胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細(xì)胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA，一般用不含Ca2+和Mg2+的鹽溶液配置，先用胰酶-EDTA 消化液清洗細(xì)胞（5.0 -10.0 ml/75cm），然后棄去消化液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask) ，觀察ATCC細(xì)胞株直到細(xì)胞變圓脫離瓶壁，此過程一般需要5-15分鐘，為了避免細(xì)胞成團(tuán)，消化細(xì)胞的過程中不要拍打細(xì)胞瓶。對(duì)于特別難消化的細(xì)胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把細(xì)胞置于37°C 促進(jìn)消化，ATCC細(xì)胞株脫離瓶壁后，立刻加入含有血清的*培養(yǎng)基中止消化，血清中某些蛋白質(zhì)能夠抑制胰酶的活性。一般情況下，離心并不需要。如果細(xì)胞需要無血清或者低血清的培養(yǎng)基，可以以125000g 轉(zhuǎn)速離心5分鐘，然后棄去中止用的培養(yǎng)基，加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細(xì)胞，移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細(xì)胞類型而定，ATCC細(xì)胞株一般是1:2-1:20，具體比例可參考說明書。胰蛋白酶會(huì)對(duì)某些細(xì)胞的細(xì)胞膜產(chǎn)生損傷，對(duì)于這種類型的細(xì)胞，可用細(xì)胞刮輕輕刮下細(xì)胞，加入適量的培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻細(xì)胞，然后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。